સેલ કલ્ચર દૂષણને અસરકારક રીતે ઘટાડવામાં આવ્યું હતું

સેલ કલ્ચરનું દૂષણ એ સેલ કલ્ચર લેબોરેટરીમાં સહેલાઈથી સૌથી સામાન્ય સમસ્યા બની શકે છે, કેટલીકવાર તે ખૂબ જ ગંભીર પરિણામોનું કારણ બને છે.સેલ કલ્ચર દૂષકોને બે શ્રેણીઓમાં વિભાજિત કરી શકાય છે, રાસાયણિક દૂષકો જેમ કે માધ્યમ, સીરમ અને પાણીની અશુદ્ધિઓ, એન્ડોટોક્સિન, પ્લાસ્ટિસાઇઝર્સ અને ડિટર્જન્ટ્સ અને જૈવિક દૂષકો જેમ કે બેક્ટેરિયા, મોલ્ડ, યીસ્ટ, વાયરસ, માયકોપ્લાઝમા ક્રોસ ચેપ.અન્ય કોષ રેખાઓ દ્વારા દૂષિત.દૂષણને સંપૂર્ણપણે દૂર કરવું અશક્ય હોવા છતાં, તેની આવર્તન અને તીવ્રતા તેના સ્ત્રોતને સારી રીતે સમજીને અને સારી એસેપ્ટિક તકનીકોને અનુસરીને ઘટાડી શકાય છે.

1.આ વિભાગ જૈવિક દૂષણના મુખ્ય પ્રકારો દર્શાવે છે:
બેક્ટેરિયલ દૂષણ
ઘાટ અને વાયરસ દૂષણ
માયકોપ્લાઝ્મા દૂષણ
આથો દૂષણ

1.1 બેક્ટેરિયલ દૂષણ
બેક્ટેરિયા એ સર્વવ્યાપક એક-કોષીય સુક્ષ્મસજીવોનું વિશાળ જૂથ છે.તેઓ સામાન્ય રીતે વ્યાસમાં માત્ર થોડા માઇક્રોન હોય છે અને ગોળાથી લઈને સળિયા અને સર્પાકાર સુધીના વિવિધ આકારોમાં આવી શકે છે.તેમની સર્વવ્યાપકતા, કદ અને ઝડપી વૃદ્ધિ દરને કારણે, બેક્ટેરિયા, યીસ્ટ અને મોલ્ડ સાથે, કોષ સંસ્કૃતિમાં સૌથી સામાન્ય જૈવિક દૂષકો છે.

1.1.1 બેક્ટેરિયલ દૂષણની તપાસ
બેક્ટેરિયલ દૂષણ ચેપ લાગ્યાના થોડા દિવસોમાં સંસ્કૃતિના દ્રશ્ય નિરીક્ષણ દ્વારા સરળતાથી શોધી શકાય છે;
ચેપગ્રસ્ત સંસ્કૃતિઓ સામાન્ય રીતે વાદળછાયું દેખાય છે (એટલે ​​​​કે, ટર્બિડ), કેટલીકવાર સપાટી પર પાતળી ફિલ્મ હોય છે.
સંસ્કૃતિ માધ્યમના pH માં અચાનક ટીપાં પણ વારંવાર જોવા મળે છે.
ઓછી શક્તિવાળા માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ, બેક્ટેરિયા નાના, કોષો વચ્ચે ફરતા ગ્રાન્યુલ્સ તરીકે દેખાય છે, અને ઉચ્ચ-શક્તિ માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ નિરીક્ષણ વ્યક્તિગત બેક્ટેરિયાના આકારને ઉકેલી શકે છે.

1.2 મોલ્ડ અને વાયરસ દૂષણ
1.2.1 મોલ્ડ દૂષણ
મોલ્ડ એ ફંગલ સામ્રાજ્યના યુકેરીયોટિક સુક્ષ્મસજીવો છે જે મલ્ટીસેલ્યુલર ફિલામેન્ટના સ્વરૂપમાં વધે છે જેને હાઇફે કહેવાય છે.આ મલ્ટિસેલ્યુલર ફિલામેન્ટ્સના કનેક્ટિવ નેટવર્કમાં આનુવંશિક રીતે સમાન ન્યુક્લી હોય છે જેને વસાહતો અથવા માયસેલિયમ કહેવાય છે.

યીસ્ટના દૂષણની જેમ, દૂષણના પ્રારંભિક તબક્કા દરમિયાન સંસ્કૃતિનું pH સ્થિર રહે છે અને પછી સંસ્કૃતિ વધુ ગંભીર રીતે ચેપગ્રસ્ત બને છે અને વાદળછાયું બને છે ત્યારે તે ઝડપથી વધે છે.માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ, માયસેલિયમ સામાન્ય રીતે ફિલામેન્ટસ હોય છે, કેટલીકવાર બીજકણના ગાઢ ક્લસ્ટર તરીકે.ઘણા મોલ્ડના બીજકણ તેમના નિષ્ક્રિય તબક્કા દરમિયાન અત્યંત કઠોર અને અસ્પષ્ટ વાતાવરણમાં ટકી શકે છે અને જ્યારે યોગ્ય વૃદ્ધિની પરિસ્થિતિઓનો સામનો કરવામાં આવે ત્યારે જ સક્રિય થાય છે.

1.2.2 વાયરસ દૂષણ
વાયરસ એ માઇક્રોસ્કોપિક ચેપી એજન્ટો છે જે પ્રજનન માટે યજમાન કોષની મશીનરીનો કબજો લે છે.તેમનું અત્યંત નાનું કદ તેમને સંસ્કૃતિમાં શોધવાનું અને સેલ કલ્ચર લેબોરેટરીઓમાં વપરાતા રીએજન્ટ્સમાંથી દૂર કરવાનું મુશ્કેલ બનાવે છે.મોટાભાગના વાઈરસને તેમના યજમાનો માટે ખૂબ જ કડક આવશ્યકતાઓ હોવાથી, તેઓ સામાન્ય રીતે યજમાન સિવાયની પ્રજાતિઓની કોષ સંસ્કૃતિને પ્રતિકૂળ અસર કરતા નથી.
જો કે, વાયરસથી સંક્રમિત કોષ સંસ્કૃતિઓનો ઉપયોગ પ્રયોગશાળાના કર્મચારીઓના સ્વાસ્થ્ય માટે ગંભીર જોખમ ઊભું કરી શકે છે, ખાસ કરીને જો માનવ અથવા પ્રાઈમેટ કોષો પ્રયોગશાળામાં ઉગાડવામાં આવે છે.

સેલ કલ્ચરમાં વાઇરલ ઇન્ફેક્શન ઇલેક્ટ્રોન માઇક્રોસ્કોપી દ્વારા શોધી શકાય છે, એન્ટિબોડીઝના સમૂહ સાથે ઇમ્યુનોસ્ટેનિંગ, ELISA અથવા PCR યોગ્ય વાયરલ પ્રાઈમર સાથે.

1.3 માયકોપ્લાઝ્મા દૂષણ
માયકોપ્લાઝમા એ કોષની દિવાલો વગરના સરળ બેક્ટેરિયા છે, અને તે સૌથી નાના સ્વ-પ્રતિકૃતિ સજીવો હોવાનું માનવામાં આવે છે.તેમના અત્યંત નાના કદને કારણે (સામાન્ય રીતે 1 માઇક્રોન કરતાં ઓછા), માયકોપ્લાઝ્મા જ્યાં સુધી અત્યંત ઊંચી ઘનતા સુધી ન પહોંચે અને કોષ સંસ્કૃતિઓ બગડે ત્યાં સુધી શોધવું મુશ્કેલ છે;ત્યાં સુધી, સામાન્ય રીતે ચેપના કોઈ સ્પષ્ટ સંકેત નથી.

1.3.1 માયકોપ્લાઝ્મા દૂષણની તપાસ
કેટલાક ધીમી વૃદ્ધિ પામતા માયકોપ્લાઝમા કોષોના મૃત્યુનું કારણ બન્યા વિના સંસ્કૃતિઓમાં ચાલુ રહી શકે છે, પરંતુ તેઓ સંસ્કૃતિઓમાં યજમાન કોષોની વર્તણૂક અને ચયાપચયમાં ફેરફાર કરે છે.

ક્રોનિક માયકોપ્લાઝ્મા ચેપને સેલ પ્રસાર દરમાં ઘટાડો, સંતૃપ્તિ ઘનતામાં ઘટાડો અને સસ્પેન્શન કલ્ચરમાં એકત્રીકરણ દ્વારા વર્ગીકૃત કરવામાં આવી શકે છે.
જો કે, માયકોપ્લાઝ્મા દૂષણને શોધવાનો એકમાત્ર ભરોસાપાત્ર રસ્તો એ છે કે ફ્લોરોસન્ટ સ્ટેનિંગ (દા.ત., Hoechst 33258), ELISA, PCR, ઇમ્યુનોસ્ટેનિંગ, ઑટોરેડિયોગ્રાફી અથવા માઇક્રોબાયલ પરીક્ષણનો ઉપયોગ કરીને નિયમિતપણે સંસ્કૃતિનું પરીક્ષણ કરવું.

1.4 યીસ્ટ દૂષણ
યીસ્ટ એ ફંગલ સામ્રાજ્યના એક-કોષીય યુકેરીયોટ્સ છે, જેનું કદ થોડા માઇક્રોન (સામાન્ય રીતે) થી 40 માઇક્રોન (ભાગ્યે જ) સુધીનું હોય છે.

1.4.1 યીસ્ટના દૂષણની તપાસ
બેક્ટેરિયલ દૂષણની જેમ, યીસ્ટથી દૂષિત સંસ્કૃતિઓ વાદળછાયું બની શકે છે, ખાસ કરીને જો દૂષણ અદ્યતન તબક્કામાં હોય.જ્યાં સુધી દૂષણ વધુ ગંભીર ન બને ત્યાં સુધી યીસ્ટથી દૂષિત સંસ્કૃતિઓનો pH બહુ ઓછો બદલાય છે, જે તબક્કે pH સામાન્ય રીતે વધે છે.માઇક્રોસ્કોપ હેઠળ, યીસ્ટ વ્યક્તિગત અંડાશય અથવા ગોળાકાર કણો તરીકે દેખાય છે અને નાના કણો ઉત્પન્ન કરી શકે છે.

2.ક્રોસ ચેપ
માઇક્રોબાયલ દૂષણ જેટલું સામાન્ય ન હોવા છતાં, HeLa અને અન્ય ઝડપથી વિકસતી કોષ રેખાઓ સાથે ઘણી કોષ રેખાઓનું વ્યાપક ક્રોસ-દૂષણ એ ગંભીર પરિણામો સાથે સ્પષ્ટ રીતે વ્યાખ્યાયિત સમસ્યા છે.પ્રતિષ્ઠિત સેલ બેંકોમાંથી સેલ લાઇન મેળવો, નિયમિતપણે સેલ લાઇનની લાક્ષણિકતાઓ તપાસો અને સારી એસેપ્ટિક તકનીકોનો ઉપયોગ કરો.આ પ્રથાઓ તમને ક્રોસ-પ્રદૂષણ ટાળવામાં મદદ કરશે.DNA ફિંગરપ્રિંટિંગ, કેરીયોટાઇપિંગ અને આઇસોટાઇપિંગ એ પુષ્ટિ કરી શકે છે કે તમારા સેલ કલ્ચરમાં ક્રોસ-પ્રદૂષણ છે કે કેમ.

માઇક્રોબાયલ દૂષણ જેટલું સામાન્ય ન હોવા છતાં, HeLa અને અન્ય ઝડપથી વિકસતી કોષ રેખાઓ સાથે ઘણી કોષ રેખાઓનું વ્યાપક ક્રોસ-દૂષણ એ ગંભીર પરિણામો સાથે સ્પષ્ટ રીતે વ્યાખ્યાયિત સમસ્યા છે.પ્રતિષ્ઠિત સેલ બેંકોમાંથી સેલ લાઇન મેળવો, નિયમિતપણે સેલ લાઇનની લાક્ષણિકતાઓ તપાસો અને સારી એસેપ્ટિક તકનીકોનો ઉપયોગ કરો.આ પ્રથાઓ તમને ક્રોસ-પ્રદૂષણ ટાળવામાં મદદ કરશે.DNA ફિંગરપ્રિંટિંગ, કેરીયોટાઇપિંગ અને આઇસોટાઇપિંગ એ પુષ્ટિ કરી શકે છે કે તમારા સેલ કલ્ચરમાં ક્રોસ-પ્રદૂષણ છે કે કેમ.